一、引言
维生素 E 作为饲料中的关键营养添加剂,兼具抗氧化与生理调节功能,其含量直接影响畜禽生长性能与产品品质。现行饲料中维生素 E 测定国标方法以高效液相色谱法为主,但该方法存在仪器成本高、前处理复杂、检测周期长等问题,难以满足基层检测机构及饲料企业的快速筛查需求。
佑科可见分光光度计凭借操作便捷、性价比高的优势,在食品营养检测领域应用广泛。本文以佑科 UV759S 可见分光光度计为检测工具,建立饲料中维生素 E 的快速测定方法,通过优化提取与显色条件,验证方法的准确性与适用性,为饲料质量快速监测提供技术方案。 二、实验部分
(一)实验材料
仪器选用佑科 UV759S 可见分光光度计(波长范围 190-1100nm,吸光度精度 ±0.002A)、高速离心机、超声波清洗器。试剂包括 α- 生育酚标准品(纯度≥99%)、无水乙醇(分析纯)、正己烷(分析纯)、联吡啶(分析纯)、三氯化铁(分析纯),实验用水为超纯水。饲料样品选取玉米型配合饲料、豆粕型浓缩饲料及预混合饲料,经粉碎过 80 目筛后密封保存。
(二)实验方法
样品前处理:称取 2.0g 饲料样品于离心管中,加入 15mL 无水乙醇 - 正己烷混合液(体积比 1:1),超声提取 20min,8000r/min 离心 5min,取上清液备用,全程避光操作。
显色反应:取 2mL 上清液于比色管中,依次加入 1mL 0.2% 联吡啶乙醇溶液、1mL 0.1% 三氯化铁乙醇溶液,摇匀后静置 5min,以空白试剂为参比。
检测条件:通过佑科分光光度计波长扫描,确定维生素 E - 联吡啶 - 三氯化铁络合物的最大吸收波长为 520nm,在此波长下测定吸光度。
标准曲线绘制:配制 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/L 的 α- 生育酚标准系列溶液,按上述显色步骤操作,以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
三、结果与分析
(一)标准曲线与线性范围
佑科可见分光光度计测得的吸光度与维生素 E 浓度呈现良好线性关系,标准曲线方程为 y=1.862x+0.005,相关系数 R²=0.9997,线性范围为 0.02-0.50mg/L,满足饲料中维生素 E(通常含量 0.01-0.80mg/g)的检测需求,无需多次稀释即可直接测定。
(二)方法适用性验证
对三种类型饲料样品的测定结果显示,该方法与国标高效液相色谱法的相对偏差均小于 2.8%。其中玉米型配合饲料相对偏差 1.3%-2.5%,豆粕型浓缩饲料 1.1%-2.2%,预混合饲料 1.5%-2.8%,均处于允许误差范围内。
针对饲料中常见的淀粉、粗蛋白、矿物质等基质,加标实验表明,当基质浓度在常规饲料含量范围内时,检测结果相对偏差仍小于 3%,证明该方法抗基质干扰能力较强,适用性广泛。
(三)精度与快速性分析
重复性实验中,对 0.10mg/L 和 0.30mg/L 标准溶液进行 6 次平行检测,相对标准偏差(RSD)分别为 1.23% 和 0.98%;对同一饲料样品连续测定 6 次,RSD 为 1.45%,均低于 5% 的精度要求。加标回收实验中,回收率在 95.6%-103.5% 之间,平均回收率 99.2%,准确性可靠。
该方法单个样品前处理时间仅 25min,检测时间不足 5min,相比国标方法(前处理 120min 以上),检测效率提升 4 倍以上,实现 “快速测定" 目标。
四、讨论
佑科可见分光光度计凭借稳定的波长精度与吸光度响应,为饲料维生素 E 快速测定提供了可靠仪器支撑。实验优化的超声提取 - 络合显色体系,有效缩短了前处理时间,且能抵抗复杂基质干扰。 但需注意,饲料中高含量油脂可能导致提取液浑浊,可通过加无水硫酸钠除水改善;维生素 E 易氧化,样品处理需全程避光。后续可进一步优化提取溶剂配比,拓展方法对高脂肪饲料的适用性。
五、结论
基于佑科可见分光光度计建立的饲料中维生素 E 快速测定方法,线性关系良好(R²=0.9997),对不同类型饲料均具有较强适用性,相对偏差小于 3%。方法精度优异,相对标准偏差低于 1.5%,加标回收率达 95%-104%。
该方法操作简便,单个样品检测周期仅 30min,显著优于传统方法,且仪器成本低、易维护,能够满足饲料企业质量控制与基层检测机构快速筛查的需求,具有重要的实际应用价值。